تعیین عملکرد مواد سنتزی با خاصیت ضد قارچی با استفاده از روش سنجش معکوس (reversal assay)

تعداد روبه افزایش قارچهای مقاوم به دارو اهمیت جستجو برای داروهای ضدقارچی را موردتأکید قرار می دهد. اگرچهغربال گنجینه های شیمیایی و یا طبیعی یک راه اصلی کشف ترکیبات ضد قارچی جدید است ولی همچنان مکانیسم اثر ترکیبات، مورد توجه صنایع داروسازی می باشد. یکی روش تعیین مکانیزم عمل،reversal assay میباشد که پایه آن بر توانایی واسطه های متابولیکی یا محصول نهایی مسیر مسدودشده توسط داروی مورد نظر در بی اثر نمودن دارو قراردارد. در این مطالعه دو ترکیب جدید ضدقارچ (a و b) به کارگرفته شد و غلظت معکوس کنندگی هرکدام از واسطه های متابولیکی با استفاده از سریال رقتی سنجیده شد. به نظر می رسد این ترکیبات مسیرهای سنتز اسیدنوکلئیک(ترکیب) aو اسیدآمینه های آلیفاتیک(ترکیبb) را مهارمی کنند. مرحله بعد سطح بیان ژن های دخیل در ساخت این اسیدهای آمینه، با تکنیک rt-pcr مورد بررسی قرارگرفت. بااستفاده از rt-pcr نیمه کمی، بر روی نمونه های rnaاستخراج شده از مخمر ساکارومایسس سرویزیه در دوحالت حضور و عدم حضور ماده ضدقارچی میزان بیان ژنهای کاندید مورد آنالیز قرار گرفت. نتایج نشان داده است که سطح بیان ژن ilv5 که کدکننده یک آنزیم کلیدی در مسیر سنتز اسیدهای آمینه مذکور می باشد، در حضور ماده ضدقارچی تغییر نموده است که این امر نشان دهنده فعالیت ترکیب b در مهار مسیر سنتز این اسیدهای آمینه می باشد.